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2mol/L盐酸溶液:量取浓盐酸l6.7mL加蒸馏水至l00mL,摇匀。
0. Olmol/L盐酸溶液: 量取2mol/L的識酸50rnL 加素销水至l0'o,omL, 摇匀 。
lo% (:m/v)三氣化铁溶液;称取三氯化铁loog,用少量燕馏水溶解过进,加浓盐酸6,mL,加蒸馏水至800mL,加2mol/L的盐酸至l000:mL,)
0.5,% (m/V)三氯化铁溶液:量取l0%三氣化铁溶液,5,0mL、2:,:nol/L盐酸50mL,加素榴水至1ooOmL,揺匀。
l000U/mL_:上霉素标准液:称取已知 U/m,g (生物效价)土霉素标准品,加2:'nol/L盐酸4:mI_,溶解完全后(约5rnin),加蒸馏本室200mL,放冰箱各用。
【实验方法与步,躲]
l•土.●意效ffi'的a定
(1)土霉素标准曲线的绘制:用土霉素标准样配成l000U/mL的标准液,用2:rnL移液
管分别取标准液 0,4,mL、 0.3mL、1,0mL、l.2mI_、l.4mL. l,6mL、l.3ml. f试管中, 加 0. 01moi/L的盐酸至lOmL,再加 0‘:5,%的三氣化铁瀋液lOmL,揺匀,静置20,rnin;另取样同上,加 0,0lmol/L的盐酸至2,0r,rnL,摇匀, 作为空白对照,在4,80nrn 的波长下'测定吸光度值• 以土霉素数价为纵坐标、 以吸光度值为積坐标绘制作标准曲线。
(2) 发醇液数价的構定: 吸取注液稀释适宜倍数 (使iiilf構后数价在标准曲线范国内) , 用移液管取l:rnLi開器液于试管中, 准确加人 0. Olmiol/L的盐酸至lOmL, 再加入 o, 5%的三報化铁溶液lOmL,摇匀,放置20mi:n,另取1mL締释液•加入 0.0lmol/L的盐酸至20,rnL,摇匀,作为空自对照, 構定48,0n,rnL波长下的吸光度值,与标准曲线对比,得到发醇液中土零素数价。 2.土●意投8液a化及除金●青子
( 1 ) 取适量发醇液, 按发醇液数价的测定方法测出发酵液效价 。
(2)取一定」体积发酵液,边搅拌边加人黄血盐o.35% (;",/V)、硫酸锌o.2% (,開/V), 并加入乙二酸酸化发開至pH1, 6一一,2.0,:搅il半30,nin后,取酸化上清液,按发醇液效价的测定方法测定其效价并计算酸化收率。
(3)将酸化的发酵液稀群l倍,用真空抽油装置进行过滤, 油饼再用乙二酸椿液冲:沈, 测出雄液的体积。按发醇液数价的调定方法测定其效价并计算过濾收率。
效价计算; 将测定的吸光,度值代人标准曲线方程, 再乘以稀样倍数即得效价。 收率计算: 收率=效价 X样品体积/上步数价 X上步样品簡 a
【注意事项】
( l):测;定样品 pH时, 样品不宜在室温下放置时问过长, .应当在取样2mLi,i 之内消定完, 不能直接测定的样品应:收样放人冰箱, 如需测定时提前从冰箱中取出放至室温测定 。
(2) 测定样品 p,H后应该用纯事本冲洗电极, 不用时应将电扱置T•饱和報化钾溶液中 D
(3)进行酸化和铁离子的去除时,操作要在恒温进行,以免土霉素活性发生变化E .
(4)撹#时要注意转速不實过快,以免将報接沉淀破坏,影■ii后续过1iaa
【思考题】
l,改变发前过雄特性的方法有哪些'?简述其机理。
2,在实验;iit程中为什么要一直演定土奪素的效价和收率'? www.sxzdhbsb.com